细胞状态是否正常？对于细胞传代而言，达到70-90%的汇合度，并具有梭形或多边形的细胞外观及透亮的特性，才是最佳的传代时期。若细胞密度太低，细胞可能面临营养不足的困境；而密度过高则会导致细胞挤压变形。确保所有实验材料准备就绪，包括37℃预热的胰酶、PBS、新鲜培养基、无菌离心管和酒精灯，任何一项缺失都不可启动实验。同时，确保无菌环境的建立。台面需要用75%酒精擦拭三遍，并使用紫外灯照射30分钟，操作人员还需佩戴手套和口罩，以避免外来杂菌的干扰。

Step 1: 温柔弃旧液。轻轻拍打培养瓶，使细胞松动，倾斜瓶身让废液顺利流入废液缸，整个过程动作要迅速且优雅。

Step 2: PBS洗涤。缓慢沿壁注入PBS，轻轻摇晃两圈以去除残余血清，倒掉时注意留下一些液体，避免冲走细胞。

Step 3: 精确加入胰酶。将37℃的胰酶均匀覆盖于细胞层，与面膜的效果相似，将其放回培养箱孵育1-5分钟。当显微镜下观察到细胞开始变圆且边缘卷起时，立即停止操作，因拖延可能导致细胞死亡。

Step 4: 加入新鲜培养基。快速倒入两倍体积的新鲜培养基，以立即中和胰酶，使用移液枪温柔吹打10-15次，使细胞如雨般均匀分散。

Step 5: 离心操作。设定1000rpm离心5分钟，优雅地倒掉上清液。管底沉淀如“细胞小丸子”，轻弹管壁以使其松散。

Step 6: 新环境入住。将细胞按1:2到1:5的比例稀释至新培养瓶，轻轻摇匀让细胞“躺平”，再将其放回37℃、5% CO₂的培养箱中。1-2小时后补加新鲜培养基，以增强细胞的舒适感。

24小时后，通过显微镜观察贴壁情况，漂浮的细胞可能是由于消化过度或接种密度过低所致。48小时后更换新鲜培养基，若观察到颜色变黄，说明细胞代谢良好，需及时补充营养。72小时内，记录细胞的生长曲线及形态变化。如果发现异常，立即排查可能的污染源或培养条件。

若细胞聚集不散，可能是由于吹打力度过大或胰酶量不足，建议在下次操作时加入“轻柔吹打20次”的指引。如果贴壁率低于50%，请检查培养瓶是否经过包被，及血清批次的稳定性。如有必要，使用聚赖氨酸作为“防滑垫”。传代后细胞大量死亡的情况，往往是因为离心转速过高或时间过长，建议调整为800rpm，离心3分钟以执行“温柔离心术”。

在细胞培养与传代的过程中，选择合适的操作步骤与技巧，不仅保证了细胞的健康生长，更体现了人生就是博在生命科学领域的追求与坚持。