### 产品及特点

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具备以下主要特点：

1. **即开即用**：用户只需提供样品DNA模板，无需复杂的预处理程序。

2. **高灵敏度**：经过优化的引物及其他组分确保了检测的灵敏度。

3. **阳性对照**：提供阳性对照样品，以便用户区分假阴性结果。

4. **特异性高**：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其他生物样本DNA的交叉反应。

5. **多功能检测**：可用于定性及定量检测，定量检测时线性范围至少为五个数量级。

6. **大容量**：本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. **科研专用**：本试剂盒仅供科研使用。

### 使用方法

#### 一、DNA提取（样本制备区）

采用自选的方法提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

#### 二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

（因阳性对照浓度较高，本步骤需在独立区域进行，以避免污染样品或其他试剂成分。）

1. 标记六个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O。

3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，震荡充分后，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，冰上待用。

4. 重复此流程，逐步稀释至6个不同浓度的标准曲线样品。

若不需制作标准曲线，则仅需将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

#### 三、试剂配制（试剂准备区）

若有N个待检样品，准备N+2个qPCR管，依照详细说明书的指导向各容器中添加所需成分。

#### 四、添加模板（模板添加区）

每个qPCR管中添加2μL模板，顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

#### 五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器的样品槽中，按照程序进行扩增。

### 结果分析

1. 制作标准曲线时，阳性对照浓度的log值作为横轴，Ct值作为纵轴，绘制标准曲线并推算待测样品的DNA浓度。

2. 若未制作标准曲线，则通过以下标准判定结果：

阳性对照：Ct值<30，呈现明显的指数增长；

阴性对照：Ct值≥38或无Ct值;

样本检测：Ct值<35，结果阳性；Ct值≥38，结果阴性；若Ct值在35-38之间需复检。

### 运输及保存

本产品需低温运输，-20℃保存，有效期一年；阳性对照应与其他试剂单独存放，避免交叉污染。

人生就是博的理念体现在我们产品的每个细节中，致力于为科研提供精准、可靠的解决方案。