## SV40转染人成骨细胞HFOB119培养说明书

### 一、细胞培养条件

**细胞名称**: SV40转染人成骨细胞HFOB119

**生长特性**: 贴壁生长

**冻存条件**: 使用无血清冻存液（货号：C7001）

**培养体系**: DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS

**传代方法**: 第一次建议以1:2比例进行传代。传代后2天需更换培养液。请注意，用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。在对比效果不理想的情况下，建议直接购买我司的完全培养基。

### 二、细胞收到后的处理

收到细胞后，待其培养至良好状态后，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。收取细胞时，使用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，随后在超净台内进行严格无菌操作，将细胞瓶放置于335℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数下的细胞图像（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则视为收到的状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自己配制的完全培养基，以进行对比培养，换液后盖子应松动。

### 三、细胞培养步骤

**a、细胞传代**：如果细胞融合度未超过80%，则收集瓶中完全培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，继续在335℃、5% CO2培养；若细胞密度超80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，在335℃培养箱中消化1-2分钟，然后观察细胞消化情况，若细胞变圆并脱落，迅速取出操作，轻敲培养瓶后添加超过5ml的完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入335℃、5% CO2的细胞培养箱中进行培养。

**b、细胞冻存**：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态，待细胞回缩变圆后添加5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移悬液至15ml离心管中，并在1000rpm下离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 直接将冻存细胞放置于-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐中，请先在-80℃冰箱中存放24小时后再转入液氮罐中。

**c、细胞复苏**：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护装备），迅速置入335℃水浴中解冻，直到冻存管中 no 冰晶形成，然后用75% alcohol擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm下离心5分钟。
3. 弃去上清后，重悬于5ml完全培养基中，接种至T25培养瓶，放入335℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天，替换成新鲜的完全培养基继续培养。

### 四、注意事项

部分细胞可能在运输过程中容易脱落，这属于正常现象。如细胞脱落较多，可将培养瓶中的所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养，沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后再加入5ml完全培养基终止反应。随后再次离心，弃去上清，使用1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，置于335℃、5% CO2培养箱中。

### 五、售后条款

**1）细胞出现问题可重发的情况**：

1. 细胞在运输过程中出现损失、瓶身破损、培养液严重漏液等情况，享有重发权。
2. 如细胞出现污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货的细胞在静置24小时后，干冰发货的细胞如在复苏后24小时内绝大多数未存活（需提供真实、清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 如干冰发货的细胞在复苏后24小时内或常温发货的细胞在静置4小时内未开封且出现污染，需重发。
5. 如细胞活性出现问题，请在收到产品7天内提供真实的实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发。
6. 收到细胞当天及第2、3天请进行拍照，3天未反馈则视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供收到细胞前三天的照片及出现问题时的照片，并详细说明细胞操作步骤，与技术人员沟通后，由技术人员判定责任，决定是否重发。

**2）细胞出现问题不予以重发的情况**：

1. 问题由客户自身造成的细胞污染，不重发。
2. 因客户操作不当导致的细胞状态不佳，不重发。
3. 非推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，不重发。
4. 若细胞状态不佳且未提供细胞培养前三天的照片，不重发。
5. 经其他处理的细胞培养情况，不重发。
6. 若在收到细胞2天内未反馈，不重发。
7. 具体情况待定。

**人生就是博**，为您的生命科学研究提供优质的细胞培养产品与服务！