人生就是博的HCC-827人非小细胞肺癌细胞培养手册为您提供了系统的细胞培养指南，确保您能够高效、安全地进行细胞实验。

一、细胞培养条件

细胞名称：HCC-827（人非小细胞肺癌细胞）

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS

传代方法：建议首次传代比例为1:2。若传代后效果不佳，可考虑购买我们提供的完全培养基进行比较实验。

二、收到细胞后的处理

为确保细胞在运输过程中的健康状态，建议在收到细胞后及时将其培养至良好状态，并加满完全培养液以封闭瓶口。清洁细胞瓶外部，随后在超净台中进行无菌操作，将细胞放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的细胞图像（建议40x、100x和200x各一张）。前三天的照片将作为售后服务的重要依据，若未提供照片则视为细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，收集培养液至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2的环境中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，并用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，并在显微镜下观察细胞变化，若细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻叩培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2的比例进行分瓶传代，补充新完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至培养瓶80%覆盖时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶，观察至细胞出现收缩变圆，立即加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落。
3. 将悬液转移至15ml离心管中，并在1000RPM条件下离心5分钟。
4. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管，直接放入-80℃冰箱保存。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴护具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至管内无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2的培养箱中培养。
4. 翌日更换新鲜完全培养基，继续培养。

四、注意事项

运输过程中部分细胞可能会因贴壁不牢容易脱落，这属于正常现象。如发现细胞状态异常，请及时将所有培养液收集至离心管，进行1000RPM离心5分钟。根据沉淀情况加入胰酶处理，确保在无菌条件下进行操作。最终按1:2比例进行分瓶传代，并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

五、售后条款

人生就是博对细胞运输和实验质量非常重视，针对细胞问题提供以下售后服务：

1) 可重发的情况

• 运输过程中细胞出现丢失、破损及严重漏液情况，将给予重发。
• 若在收到产品48小时内发现细胞污染，经核实后可重发。
• 常温运输的细胞在静置24小时后或干冰运输后复苏24小时内细胞未存活的情况则可重发。
• 如出现活性问题，可在收到产品7天内进行检测并提供证明，以便重发。
• 收到细胞后的前三天请务必拍照，若未告知，将视为产品合格。

2) 不予以重发的情况

• 客户造成的细胞污染及错误操作导致的问题不予重发。
• 使用非推荐培养体系造成的细胞状态不良，同样不予重发。
• 如细胞在培养前未提供前三天的照片，或收到后2天内未告知问题，则不予重发。

如需了解更多信息，请随时联系人生就是博，我们将竭诚为您提供专业的支持与服务。