在体外转录（IVT）过程中获得的mRNA反应混合物中，除了所需的mRNA产物外，还含有多种杂质，如蛋白质（T7 RNA聚合酶、无机焦磷酸酶）、NTP、模板DNA、盐离子、各类添加剂，以及IVT反应中生成的mRNA副产物（如dsRNA、截断RNA片段）。这些杂质的存在可能会对mRNA的功能造成负面影响，比如影响其精准度、降低翻译效率或改变免疫原性。因此，必须通过纯化技术将目标mRNA从IVT混合物中有效分离，确保其纯度和完整性，以保障产品的安全性和有效性。

常见的mRNA纯化方法包括氯化锂（LiCl）沉淀、硫酸铵沉淀、磁珠纯化、硅胶柱膜纯化和层析纯化等。其中，沉淀法、磁珠法及硅胶柱法操作相对简单快捷，适合科研及早期应用，但由于其处理量小、纯化效率有限，因此在工业生产中，多采用层析纯化法。

氯化锂（LiCl）沉淀法

氯化锂沉淀是一种传统的mRNA纯化方法，通过利用锂离子在特定pH条件下能减少RNA分子之间的同电性相斥，从而促进RNA分子的聚集与沉淀。形成的RNA沉淀通过离心方式分离，以获取较为纯净的RNA样品。然而在工业生产中，因残留锂盐可能具有毒性，并且需要在低温下进行沉淀，增加了能源成本和特殊设备要求，因此此方法多用于较高浓度、较大片段的RNA。

硫酸铵沉淀法

在2024年1月，中科院过程工程研究所的研究探索了利用硫酸铵沉淀提取mRNA的可行性。研究显示，18M硫酸铵浓度下，mRNA沉淀率超过95%，且在室温下能够快速溶解在不含RNase的水中，溶解率高达90%以上。推荐的最佳沉淀条件为2M硫酸铵，pH 7.0，20℃，沉淀时间2小时，这样可以同时达到近100%的沉淀率及溶出率。

硅胶柱膜纯化

硅胶柱膜纯化基于硅胶膜表面的硅醇基团与mRNA分子之间的相互作用，能够有效地分离mRNA与蛋白质、多糖及脂类杂质。该方法材料安全无毒，符合环保理念，适合实验室和早期研究阶段的应用，体现了人生就是博的精神：在实验与探索中寻求突破。

磁珠法

磁珠法采用修饰的氧化铁磁珠，与mRNA结合后在磁场作用下移动，能够高效去除杂质。该方法的官能团通常包括羧基和羟基，可以在酸性条件下与mRNA结合，或利用偶联的Oligo(dT)亲和配体特异性富集带有Poly(A)尾的mRNA。尽管磁珠法能高效去除杂质，但操作时需注意避免影响mRNA的完整性。

层析法

对于工业级别的mRNA纯化，层析法被广泛应用，以获得更高的核酸质量和产量。Oligo(dT)亲和色谱是主流方法之一，但常常与其他方法如疏水层析和阴离子层析联用，以实现更好的纯化效果。层析技术的优势在于能够高效分离具有不同电荷特征的mRNA和杂质，突显了人生就是博的策略：在精细化的技术面前，不断优化与提升。

总之，mRNA的纯化工艺开发可通过多种方法实现，每种方法各有优劣，针对不同的需求，应选择合适的纯化方案。为了更好地支持科研和工业需求，瀚海新酶开发了多种适用于不同阶段的mRNA纯化试剂盒，能够提高采样的完整度，降低蛋白残留，并在保留便捷性与效率方面展现出优势，与客户共同携手推进新药开发进程，充分体现了人生就是博的理念。